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家禽血液的提炼方法
据我所知，家禽的血液一般是不用来提炼的。
我们高中做实验时，书上讲
不用
家禽的血
提炼dna
，是因为家禽的血液里的细胞是成熟的（貌似是这样了）
血清中禽流感抗体含量的检测方法
禽流感是由A型流感病毒引起的一种高度接触性传染性疾病。给世界养禽业造成了巨大的经济损失。禽流感病毒可分为不同的亚型，世界各地的禽流感主要由高致病性的H5和H7两种亚型引起，而人对其中的H1和H3亚型易感。快速诊断禽流感病毒具有重大意义。目前禽流感的实验室检测是比较快速、准确的方法。随着血清学实验技术和生物工程技术的飞速发展，禽流感诊断技术的研究也不断取得新进展。琼脂扩散试验、血凝和血凝抑制试验等常规方法的使用虽有一定的优势，但免疫荧光法和ELASA也日益显示出其快捷准确的特点：分子生物学的发展为核酸序列分析法的建立创造了条件,也使PCR，RT－PCR及核酸探针等检测技术成为可能。这篇文章就是对有关该病的诊断方法加以总结，并提出了认为比较可行的改进方法，旨在方便对禽流感做出及时而有效的诊断并采取相应措施。
1. 病毒的分离鉴定
无菌采集病料经处理后接种9－11日龄鸡胚，收取尿囊液测定血凝活性。若为阴性则应继续盲传2－3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫(ND)抗血清做血凝抑制(HI)试验!以排除ND感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异核心抗原，核糖蛋白(NP)或基质蛋白(MP)，再用血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验鉴定A型流感病毒亚型。分离鉴定的同时进行致病力试验，确定毒力强弱。但是流感病毒“O”相毒株不凝集鸡红细胞，故近来在流感病毒鉴定中常用豚鼠或人红细胞来代替。然而，该两种细胞无细胞核，沉积慢，一般在红细胞凝集及凝集抑制测定中需60分钟才能观察结果，同时在“U”型孔板中，很难沉积成像眼泪样的点即当中常有小空[1]。
病毒的分离鉴定对禽流感的诊断比较确实,但操作程序繁琐、费用多、耗时费力。
2. 血清学诊断技术
2.1 琼脂扩散(AGP)试验
进行病毒抗原型特异性鉴定即用已知阳性血清和末知抗原进行AGP试验。
受检样品是具有血凝素活性的鸡胚尿囊液。AGP是用来检测A型流感病毒群特异性血清抗体，即抗核糖蛋白(RNP)和基质蛋白(MP)抗体，因而适用于鉴定流感病毒 。1979年Beard首次将AGP用于禽流感抗体检测[2]。
此法虽简单易行，但是敏感性较差，易出现假阳性。AGP最常用的是免疫双扩散，赵增连、陈海燕等分别开展了禽流感病毒快速定型双扩散法的研究，不仅提高了其敏感度，且快速省时，在此方法基础上建立的AGP诊断技术及其诊断试剂盒，在全国范围内得到推广应用，并取得良好的效果。
2.2 血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)
一般情况下，新分离毒株要先鉴定出特异性NP或.MP抗原型(用AGP)确定禽流感病毒，再做HA亚型的鉴定[3]。
现已有人采用改进HA试验方法，称为HA加敏法。该法测抗体效价比常规性高2－4倍，若抗原用乙醚裂解其敏感性比常规法高4－6倍，但观察时以30min内为好，否则易出现假阳性。另外，还应注意在HI试验时，应先除去特异性凝集反应。许多禽类血清都含有非特异性因子，能和红细胞表面受体竞争性地作用于病毒表面的血凝素而发生非特异性凝集反应。通常用受体破坏酶(RED)即霍乱菌培养液处理法或高碘酸钠法制备血清[4]。
HA、HI 特异性好，是亚型鉴定的常用方法，但其操作过程繁琐费时，并且由于用已知HA亚型的抗血清不能检出新的HA亚型的禽流感病毒，所以用该方法鉴定不如琼脂扩散实验简便和快捷。
2.3 神经氨酸酶抑制试验(NIT)
根据A 型流感病毒的表面抗原特性,特别是血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)特性，不仅可通过HI试验对病毒进行坚定，而且可通过NI试验进行鉴定。1983 R.A.Van.Densen介绍了NI试验的一种改进法－平板微量NI试验，此法虽不能提供常量法的定量，但却是A型流感病毒的病毒分类和抗体检测的快捷方法， 试验证明微量NI试验能对分离物做出准确鉴定而常量NI试验检测亚型混合物似更敏感[5]。
目前国家兽医实验所已将微量NI试验列为流感病毒分离物定型及筛选畜禽血清9型NA抗体的常规方法，诊断中也已广泛采用此法特别是美国在80年代火鸡发生流感病毒期间，每次流行所得的血清样本用微量NI试验所作出的A型流感病毒亚型鉴定结果已为病毒分离、疫苗接种和流行病学资料所证实。这种方法已被证明是快速的且成本较低和有可重复性。这种技术的可靠性将导致NI试验的广泛应用。
2.4 中和试验(NT)
病毒中和实验技术是反映机体抵抗特定病毒感染能力的最可靠方法。流感病毒中和实验技术有以下优点：（1）由于中和抗体作用于流感病毒表面血凝素蛋白（HA），使流感病毒失去感染能力，因此，流感病毒中和实验主要用于检测血清中的特异性抗血凝素蛋白抗体。（2）流感病毒中和实验既能检测病毒株的功能性变化，又能反映机体的抗病毒水平。（3）该方法主要使用感染性病毒，不需要进行病毒或病毒蛋白的纯化，因此，可以被迅速用于检测新病毒或人群免疫状态[6]。
以中和试验(NT)来鉴定或滴定流感病毒时常用鸡胚或组织培养细胞，操作方法与其他病毒(如NDV)的中和试验相同。病毒中和实验技术是一个相当复杂的过程，参与中和反应的因素有病毒、抗血清和宿主细胞。这些因素的变化都会影响中和实验的结果。因此，对中和实验的整个过程进行严格的质量控制。每次测定必须设立阳性和阴性血清对照，阳性和阴性细胞对照，以及对病毒使用剂量进行滴定。
NT试验是最敏感而特异的血清学方法，只有抗体与病毒颗粒上的表面抗原相对应，特别是与吸咐到宿主细胞上的病毒表面抗原相对应，才能在实验中取得满意的显示效果。 因此，某一个血清型的中和试验抗体只与同组内地其他病原表现出有限的交叉反应。病毒中和试验操作繁琐耗时费料，临床上几乎不用。但作为经典方法在病毒鉴定中起着重要作用，许多新的检测方都要与之为标准进行比较[7]。
2.5免疫荧光技术(IFT)
免疫荧光技术就是荧光抗体技术(FAT)。 IFT早在1961年就开始用于人类流感的快速诊断。1984年滨西法尼亚州爆发禽流感时，Skeeles将IFT首次用于AIV的检测。IFT最早用于病毒的鉴定和定位病毒感染细胞中特异性抗原。主要是核内荧光:用MP抗原的荧光抗体主要出现胞质荧光，核内也有部分荧光[8]。
用于禽流感病毒的诊断常用直接荧光抗体法即在组织触片上直接染色，以荧光显微镜检查荧光 。一种AIV的荧光抗体可用来检测不同亚型的其他病毒。
IFT用于诊断具有快速、简便、敏感性好的特点，而且费用较低，其敏感度同病毒的分离鉴定相当，有时高于用鸡胚进行的病毒分离。但是需要注意的是如何避免和降低标本中出现的假阳性(非特异性荧光)问题。
对一株杂交瘤细胞分泌的流感病毒的单克隆抗体进行检测时，发现间接固相免疫荧光技术的敏感性比HI 高40－150倍。间接免疫荧光技术也可以用来检测核蛋白(NP)基质蛋的(MP)抗原与抗体的反应，其敏感性很高。但对抗原制备要求较高，需用非离子型去污剂对纯化的病毒粒子进行裂解[9]。
2.6 酶联免疫吸附法(ELISA)
ELISA的基本原理是：酶结合物与相应抗体或抗原特异性结合，再遇酶底物时，在酶的强烈催化下使原来无色的底物产生化学反应，即形成有色的产物，便可用肉眼或分光光度计定量检测其含量。该方法具有特异性、敏感性、快速性和简易性等优点。在流感病毒微量中和实验中，酶结合物（HRP标记的羊抗鼠IgG抗体）与存在于MDCK细胞膜上的病毒核蛋白抗原-核蛋白单克隆抗体复合物结合，HRP酶催化OPD，使无色底物形成橙黄色化合物，再由ELISA检测仪测定吸光度值，从而获得中和抗体滴度[11]。
1974年Jenning等首先用ELISA对注射流感病毒所产生的抗体消长规律进行了检测。Lanbre认为ELISA的敏感性远高于HI补给结合反应 。Meulemans(1987)对ELISA、AGP、HI检测AIV抗体进行了比较研究。发现AGP和ELISA一样均能检测型特异性抗原(抗体)，但敏感性远低于ELISA，HI适用于亚型的检测，其敏感性不如ELISA。1993 年Shodihall用混合纤维素脂膜或硝酸纤维素膜代替微量反应板，建立了快速诊断的DAS－ELISA大大缩短了诊断时间，并可保留ELISA的特异性、敏感性，其结果又不需要特殊仪器分析、可用肉眼判定。
随着分子生物技术的发展，中国农业科学院哈尔滨兽研所的李海燕等用表达禽流感病毒核蛋白的杆状病毒感染S9昆虫细胞，以其表达产物制备抗原，建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接(重组核蛋白)ELISA诊断技术(rNP－ELISA)确定了其最适工作条件，并对3138份鸡血清进行了检测。实验证明rNP－ELISA与全病毒间接ELISA(AIV－ELISA)，AGP及HI的符合率分别为99.9%、97.8%、98.8%，并能100%检出AGP阳性及疑似HI阳性的血清样品。 这证明了rNP－ELISA是检测A型禽流感病毒血清特异性抗体的一种特异、敏感、微量、快捷、经济的血清学诊断技术[11]。
ELISA方法的敏感性和特异性与抗原的纯度直接相关 。1984年Abraham等报道了抗原快速提纯法，所需时间比常规法缩短10倍，并且研究结果表明应用提纯抗原几乎全部排除了假阳性反应。
目前美国Kiregard Reery和Labortories有试剂盒出售。ELISA成为AI流行病学普查及早期快速诊的最有效和最实用的方法。
3 分子生物学技术
近年来，随着现代生物技术的发展，分子生物技术已被大量应用于禽流感的快速诊断。
3.1聚合酶链反应(PCR)及反转录—聚合酶链反应(RT—PCR)
PCR是近来发展成熟起来的一种体外基因扩增技术，能在数小时内使DNA呈指数增加。已成功地用于多种病毒的基因检测和分子流行病学调查等其检测原理为：寻找传染性因子的特异DNA序列。对待测样品进行PCR扩增， 如果检测出了相应的扩增带，则判为阳性反应；反之，无扩增带则为阴性反应。
鉴于引起致病的禽流感病毒多是H5和H9血清亚型，在PCR技术的基础上，崔尚金等(1998)建立了一种直接检测禽粪样和鸡胚尿囊液中AIV—H9亚型RNA的RT－PCR反应，并将此法与AGP和电镜技术作了比较，结果表明引物的特异性决定了产物的特异性，并且该方法灵敏度高，检测过程仅需8h左右，并且大大缩短了感染后的检出时间。
应用毛细管PCR(15min30个循环)代替常规PCR(2.5个小时30个循环)以进一步缩短检测时间的研究也已展开并进入更深入的领域，以期用于不同样品(组织、组织液、分泌液、粪便等)的检测，区分高致病力毒株和低致病力毒株与非致病力毒株，从而深入探讨该方法在AIV的临床早期诊断，流行病学调查及发病机制中的应用价值，为我国制定AIV的综合防制措施做出贡献[12]。
3.2 核酸探针技术/核酸分子杂交技术
这项技术是目前生物化学和分子生物学研究应用最广泛的技术之一，是定性和定量检测特异DNA或RNA的有力工具。
核酸探针技术的原理，在进行杂交时，用一种预先分离纯化的已知DNA或RNA序列片段去检测末知的核酸样品，对作检测用的已知DNA或RNA序列片段加以标记的片段就称为核酸探针。作为核酸探针的DNA或RNA是各种病原微生物基因的一部分。 在变性分开的待检DNA或RNA单链中加入与其有互补作用的核酸探针。探针在一定条件下就能与原来变性分开的DNA或RNA单链上的互补区段形成氢键，从而结合成杂交双链，通过洗涤，除去未杂交上的标记物，然后进行放射自显影，即可确定原待检样品有无与探针互补的DNA或RNA序列。
Bashiruddin等(1991)报道了扩增HA基因来分析致病毒株与非致病毒株的差异，证实了致病毒株与非致病毒株氨基酸的差异，显示了本方法的应用前景[13]。
3.3荧光PCR法
利用生物学手段，用荧光PCR方法快速检测禽流感病毒的方法已在北京通过专家鉴定，这一研究成果不仅在国内属于首次，而且在国际上也属于先进水平。它与国际标准方法鸡胚病毒分离相比，不仅无需做鸡胚病毒分离培养，而且时间也由原来最短的21d缩短为4h。
4 电镜技术
由于流感病毒为正粘病毒，属于形态特征性强的病毒,因而可用电镜技术来诊断。为提高禽流感的检出率，除样品制备技术外，取病料的部位和时间也是获得准确检验结果的关键。病料的采集部位及取材时间应根据禽流感病毒在动物体内分布特征及其感染特性而定[15]。
5 流感实验室检测中应注意的若干问题（高致病性流感病毒）
（1）禁止在同一实验室，更不应在同一接种柜中，同时处理接种未知临床标本、已知阳性标本
（2）禁止在同一实验室，同一时间处理，接种采自不同动物的标本；动物标本（如禽、猪等）必须与人的标本分别保存。
（3）接种后剩余原始标本，尤其分离出病毒的标本需暂时冻存，有条件的应置-70℃或以下保存，以便需要时可进行复查，待分离物经国家流感中心鉴定完后方可处理掉。分离阴性的标本应随时弃之。
（4）严禁实验室交叉污染：在病毒分离时严禁设阳性对照及操作在人群中已消失的流感病毒。
（5）向国家流感中心送毒株时，量至少需5 ml，同时需自己保存一些，以便寄送过程发生意外时可继续补送。
（6）流感病毒在-20℃～-40℃ 时不稳定，故不宜在此温度下长期保存。
（7）鸡胚中分离出的流感病毒，应尽量别在MDCK细胞上传代。因当今国内所用的MDCK细胞属肿瘤细胞系，一旦病毒通过它传代就无法用于疫苗制备。
（8）寄送毒株时一定需附上送检表。寄送毒株需及时，尤其鉴定不出的，异常的毒株应尽快向国家流感中心寄送。寄送时用快速直送国家流感中心[16]。
总结
使用常规方法检测禽流感及其抗体仍是目前世界上普遍接受的方法。这些方法包括病毒的分离、琼脂扩散实验鉴定病毒和测定特异性的血清抗体，血细胞凝集及其抑制试验鉴定病毒或血清抗体亚型。 采用鸡胚中和试验来鉴定病毒或血清抗体亚型也是一种可以接受的方法，但相对血凝抑制试验较为麻烦。随着科学技术的发展，检测该病毒和血清的方法出现了免疫光法和ELISA法，这些方都有快捷的特点，特别是日益完善并趋向成熟的ELISA检测方法,因其简捷、敏感、特异性强等优点而越来越得到广泛的重视和应用。随着分子生物学的发展，核酸序列分析法越来越可能成为一种更准确可行的方法,特别是它能从分子生物学的发展，核酸序列分析法越来越可能成为一种更准确可行的方法，特别是它能从分子水平揭示HPAIV甚至潜在HPAIV毒株。这种方法虽然在一般实验室还不能应用,但RT－PCR技术为从基因水平检测禽流感病毒RNA提供了灵敏、特异和快捷准确的方法。正在进行的应用毛细管PCR代替常规PCR，以进一步缩短检测时间的研究和根据禽流感NP的高度保守性而建立的rNP－ELISA检测法，不仅具有与AGP、HI同样的特异性，而且具有更高的灵敏性，可在微克水平上进行检测!都是很有前途的方法。将rNP－ELISA检测技术及其成套的成品试剂组装成诊断试剂盒，也取得了很好的实验效果。
在以上各种检测方法及科学技术发展的基础上，将PCR技术与ELISA技术结合起来，建立一种新的实验室检测AIV的方法，将有较大的研究价值其实。其实验原理（以此类方法中最简单的双引物双标记法为例）如下：
PCR的一对引物中!其中一种引物用生物素标记，另一种引物用地高辛标记，酶标微孔板上用生物素的亲和素包被(生物素的亲和素与生物素特异的结合)。PCR扩增后纯化片段加入微孔板中。此时，微孔板上包被的生物素亲和素将与引物上的生物素结合而捕捉了PCR片段，再在微孔板中加入辣根过氧化物酶标记的抗地高辛抗体，该抗体将与另一引物上的地高辛结合，从而形成生物素亲和素－生物素－PCR片段地－高辛－抗地高辛－酶的复合物。加入酶的相应底物进行显色，便可判断PCR扩增的有无。由于该方法是PCR技术和ELISA技术的结合，所以它是一种两级放大系统,即PCR放大和ELISA放大。故而它的灵敏度更高，同时这种方法避免了PCR产物分析时的电极及染色过程，所以更为快捷、简便、灵敏。
鸽子血怎样做成血块？
把鸽子血收集起来，然后锅内烧开水，放少许盐，把鸽血放入水中，凝固成块捞出即可。
禽流感的传染途径
禽流感的传染途径
禽流感知识问答
中国疾病预防控制中心流行病学首席科学家 曾光
人禽流感是一种新传染病
1.什么是禽流感?
禽流感这个名称，对一般人来讲可能有点陌生。因为在过去相当长的一段时间里，人们把它称为鸡瘟，意大利1878年首次报道。1901年证实其病原为滤过性病原体，1955年才证实该病原为甲型流感病毒的一员。后来发现实际上在禽类中还存在一种相似的疾病叫新城疫。两者常常被混为一谈。
为把二者区别开，现把前者称为禽流感或真性鸡瘟、欧洲鸡瘟，把后者称为新城疫或伪鸡瘟、亚洲鸡瘟。所以，禽流感是由甲型流感病毒引起的一种人畜共患的急性传染病。
根据致病力的不同，禽流感病毒可分为高致病性、低致病性和非致病性三大类。高致病性禽流感因传播快、危害大，被世界动物卫生组织列为A类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。
2.禽流感病毒与流感病毒是什么关系？
我们通常所说的流感，是由甲（A）、乙（B）、丙（C）三型流感病毒引起的一种人类急性呼吸道传染病。甲型和乙型，特别是甲型可引起人类流感大流行，丙型仅引起散在病例。禽流感为甲型流感病毒引起。
甲型流感病毒具有血凝素（H）和神经氨酸酶（N）两种表面抗原，H和N又可进一步细分，H可分为H1～H15，N可分为N1～N9。不同的血凝素和不同的神经氨酸酶会组成一个个具有不同抗原性和致病性的流感病毒，专业术语称之为流感病毒亚型。
甲型流感病毒的亚型有145个，其中能引起人类流感的主要为H1～H3型，且H1N1、H2N2、H3N2曾在人间造成流感大流行。其他多数亚型的自然宿主为禽类、猪、马等多种动物，特别是水禽类，而且所有的H1～H15、N1～N9亚型抗原都可以从动物中分离到。
3.什么因素决定流感是否会大流行？
流感病毒的最大特点是抗原变异性，而这种变异性能够引起传播力的变化。其中A型抗原变异性最强，经常发生小的变异，称为“抗原漂移”。流感病毒的变异程度不同，引起流行的程度也不同。当流感病毒发生大的变异或亚型转变时，称为“抗原转移”，这时就可能引起世界性流感大流行。相比较而言，B型变异性较弱，只会引起局部地区的暴发和流行；C型比较稳定，仅引起散发病例。因此A型流感病毒是人类研究和预防控制的重点。
4.禽流感病毒抵抗力如何？
禽流感病毒在低温、干燥以及甘油中可保持活力达数月至一年以上。在干燥的尘土中，病毒能活存14天。在较低的温度下，病毒在污染的粪便中存活至少3个月。在水中，22℃时存活长达4天，0℃时可超过30天。在冷冻的禽肉和骨髓中，可存活10个月。禽流感病毒怕阳光、怕热，对普通消毒剂也很敏感。在直射阳光下，40－48小时即可被灭活。通过加热（60℃30分种，100℃1分钟）或普通消毒剂（福尔马林、碘复合物等）即可杀灭病毒。
5.为什么说人禽流感是新传染病？
虽然禽流感在禽鸟等动物中已经流行了100多年，但以前一直没有人类感染的报道。1997年，在我国的香港地区，发生了18例人禽流感病例，其中6人死亡。该次暴发的人禽流感，病毒株与当时发生在香港家禽中的禽流感的病毒株一致，均为H5N1型，这是第一次有记录的禽流感感染人类。所以说，禽流感对于人类来说，是一种新发现的传染病。
禽流感的传播特点
6.禽流感的传染源是什么？
传染源是指体内有病原体生存、繁殖并能排出病原体的动物和人。禽流感的传染源主要是病禽和带毒禽，包括水禽和飞禽。研究显示，对于高致病性禽流感，1克污染的粪便中病毒的含量就可造成100万只禽感染。目前还不能认为人类是禽流感的传染源。
7.禽流感的易感动物有哪些？
对某种传染病具有感染性的动物称为易感动物。鸡、火鸡、鸭、鹅、鹌鹑、雉鸡、鹧鸪、鸵鸟、鸽、孔雀等多种禽类对禽流感均易感。最敏感的为鸡、火鸡，鸭、鹅及其他水禽多为隐性感染。水禽与旱禽同场混养可造成交叉感染，病毒很容易在大规模饲养的鸡群或鸭群中传播。野生与养殖水禽可通过使用共同水体传播。
除了感染禽类，禽流感还可以感染猪。
8.禽流感在禽之间如何传播？
禽流感主要通过接触感染的禽及其分泌物、排泄物，污染的饲料、水、蛋托（箱）、垫草、种蛋、鸡胚和 *** 等媒介，经呼吸道、消化道感染，也可通过气源性媒介传播。
在自然界中，鸟类带毒最为广泛，因此，迁徙面广的候鸟、野鸟、水禽对本病传播起着重要作用。家禽体表的寄生昆虫是否也带毒，能否通过叮咬而感染，目前尚不明了。
9.禽流感病毒通过什么途径传播给人类？
禽流感病毒可通过消化道和呼吸道进入人体传染给人。如果直接接触带有相当数量病毒的物品，如家禽的粪便、羽毛、呼吸道分泌物、血液等，也可经过眼结膜和破损皮肤引起感染。
10.禽流感的高危人群包括谁？
兽医和长期从事鸡、鸭、鹅、猪等动物饲养、贩运、屠宰的人员。
11.人与人之间会传播禽流感吗？
目前只发现经家禽传染给人的病例，还没有发现人与人之间传染的案例。也就是说，人和人之间还没有证据证明是可以互相传染的。不过，WHO警告说，从理论上说，如果病毒变种，就可能出现人与人之间的传播。
12.禽流感是如何在局部地区传播的？
禽流感很容易从一个农场传播到另一个农场。禽类的粪便可含有大量病毒，造成灰尘、土壤污染，再通过空气引起禽类之间的传播。病毒通过污染器械、运输工具、饲料、笼、衣服，特别是鞋子，从一个农场带到另一个农场。病毒还可通过动物的脚和身体携带（如啮齿类动物）而传播。活禽在拥挤、卫生状况差的市场进行交易，也是传播的一种途径。目前，苍蝇传播此病毒的能力尚未得到证实。
13.禽流感是如何远距离传播的？
通过活家禽的国际贸易，禽流感可从一个国家传播到另一个国家。迁徙鸟类，包括野生水禽、海禽和岸禽类，可长距离携带病毒。野鸭是最引人注目的禽流感病毒的自然宿主，其本身对病毒感染具有较强的抵抗力，有时仅有轻微的、不致命的疾病表现，但它们可长距离携带病毒，并在粪便中排出病毒。人们饲养的鸭、火鸡、鹅及其他用作商业、家养的禽类，会因此造成致命性的感染。家禽的自由流动、与野生鸟类共用水源或者使用一个可能被感染的野生鸟类粪便污染的水源，病毒传播的危险性最大。
14.吃煮熟的禽肉、蛋会被传染吗?
人类感染禽流感病毒的途径主要是接触感染。禽肉煮熟煮透后，病毒可被杀死，传播的可能性较小，目前尚未发现由于吃禽肉及蛋而受到感染的病例。但如果病禽未经煮熟煮透食用，病毒就可能进入人体。所以如果食用未经检疫或来自疫情暴发区的家禽，则不排除染病风险。
15.买活鸡回家吃是否会被传染?
如果是健康的活鸡基本是安全的，但如果是病鸡就有危险。WHO警告说，人不管接触什么样的病鸡都同样有危险。少量染病的家禽能幸存下来，但它们至少在10天之内还会排泄含病毒的粪便。另外，鸡的翅膀有可能藏有禽流感病毒，所以，鸡翅膀扑打时可能会造成病毒释放。
16.羽绒制品是否传播禽流感？
羽绒制品通常会经过消毒、高温等多个物理和化学处理过程，传播病毒的几率应当很小。
禽流感的临床表现
17.禽流感的潜伏期有多长？
潜伏期是指病原体侵入机体到最初症状出现之间的这段时期。禽类禽流感的潜伏期从几小时到数天，最长可达21天。人类患上禽流感后，潜伏期一般在7天以内。
18.禽类患禽流感有哪些表现？
禽类感染后发病有两种形式：
低致病性禽流感仅引起轻微的症状，有时仅表现为羽毛皱、乱和产蛋量下降。
高致病性禽流感禽类可突然死亡，且死亡率高，饲料和饮水消耗量及产蛋量急剧下降。病鸡极度沉郁，头部和脸部水肿，伴鸡冠发绀、脚鳞出血、神经紊乱。鸭、鹅等水禽有明显的神经和腹泻症状，可出现角膜炎症，甚至失明。
养殖场一旦发现家禽出现上述症状，即可怀疑为高致病性禽流感。
19.人类患禽流感有哪些症状？
人类患上禽流感后，早期症状与重症流感非常相似，表现为高热、流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、头痛、全身不适，部分患者可有恶心、腹痛、腹泻、稀水样便等消化道症状。有些患者可见眼结膜炎等眼部感染，体温大多持续在39℃以上。部分患者胸部X线片会显示单侧或双侧肺炎，少数患者伴胸腔积液。有些病人可发生急性呼吸窘迫症及其他严重威胁生命的综合征。人类患禽流感的病死率高达30％以上。
禽流感的诊断治疗
20.禽类感染禽流感如何进行实验室诊断？
采集活禽样品时，可使用泄殖腔拭子和气管拭子取样。采集死禽样品时，应采集气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织器官。对小珍禽，应采集新鲜粪便。
实验室检验包括病原学诊断和血清学检验。病原学检验包括病原分离、基因鉴定和毒力测定。血清学诊断主要包括琼脂凝胶免疫扩散试验（不适用于水禽）、血凝抑制试验（H1）等。
21.如何确认发生了家禽禽流感？
据农业部2004年1月28日发出的《关于加强高致病性禽流感防治工作的紧急通知》，我国对高致病性禽流感疫情按下列程序确认：
①省级畜牧兽医部门接到疫情报告后，派2名以上禽流感专家到现场进行临床诊断，临床症状明显的，可怀疑为高致病性禽流感疫情。
②对怀疑为高致病性禽流感疫情的，及时采集标本送省级实验室进行血清学检测，诊断结果为阳性的，可确定为高致病性禽流感疑似病例。
③对疑似病例须派专人将标本送国家禽流感参考实验室做进一步鉴定，标本不得邮寄。
4国家禽流感参考实验室对各省、自治区、直辖市送检的病料进行病原分离和鉴定，并将结论报农业部。
22.人类禽流感的诊断依据是什么？
人类禽流感的诊断原则是根据流行病学、临床症状和实验室检查等手段，综合分析，予以诊断。参照于恩庶主编的《新发现和再肆虐传染病诊断标准和防治指南》，诊断依据如下：
①流行病学史禽流感发生在前，即某地区某禽类（鸡、鸭、鹅等）养殖场大批禽出现禽流感样症状，并死亡；附近或周边地区出现禽流感流行或暴发。
②临床表现突然起病，发热（大于38℃）、咳嗽、咽痛，可出现头痛、头晕、全身酸痛、乏力等中毒症状，可伴有干咳、流鼻涕、流泪等呼吸道症状。少数病例有食欲减退，伴有腹痛、腹胀、呕吐等消化道症状。
③实验室检查从病人鼻咽或气管分泌物中分离到流感病毒；患者恢复期血清中抗流感病毒抗体滴度比急性期高4倍以上；在患者呼吸道上皮细胞查到流感病毒颗粒特异的蛋白成份或特异的核酸；采集标本经敏感细胞将病毒增殖一代后，查到流感病毒颗粒特异的蛋白或特异的核酸。
4病例分类我国目前还没有统一的人类禽流感病例分类标准，国家卫生部正在组织制定。
23.禽类感染禽流感后需要治疗吗？
目前对禽流感尚无可靠的治疗方法。禽类感染禽流感后，对病禽必须彻底扑杀，以防止疫情扩散。
24.人感染禽流感后如何治疗？
①一般治疗按呼吸道隔离1周或至主要症状消失。病人需卧床休息，多饮水，适宜的营养，补充多种维生素，保持鼻咽及口腔清洁。症状重者应住院治疗。在出现细菌性并发症时，才使用抗生素。
②对症治疗有高热及头痛者，可用物理降温或给予解热镇静剂，小儿禁用阿司匹林。对高热、呕吐者应予以静脉补液。对咳嗽、咯痰者，可服用止咳、祛痰药。
③服用抗流感病毒药物金刚烷胺和金刚乙胺为病毒M2蛋白抑制物，对甲型流感有效，其作用是阻断病毒吸附于敏感细胞。通常发病48小时内开始用药，可使病毒排出量减少，排毒时间缩短，临床症状减轻，一两天即可退热，并可预防感染向下呼吸道蔓延，减少肺炎发生。扎那米尔（Za－nimivir）和奥司托维尔（Oseltamivir）是神经氨酸酶抑制物，能够抗甲、乙型流感病毒。
25.人得了禽流感可以治好吗？
大多数患者经及时治疗后均可治愈。此病病程短，恢复快，且不留后遗症。少数患者，特别是年龄较大、治疗过迟的患者，病情会迅速发展，病人可因进行性肺炎、急性呼吸窘迫综合征、肺出血、胸腔积液、全血细胞减少、肾衰竭、败血症、休克等多种并发症而死亡。所以，病人一旦出现以上症状，应及时就医。一旦被怀疑为H5N1病毒感染，应马上住院隔离治疗，并报告疫情，防止病情恶化和传染扩散。
禽流感的传染途径是什么？
楼主：
禽流感的传染途径：
（1）经过呼吸道飞沫与空气传播。病禽咳嗽和鸣叫时喷射出带有H5N1病毒的飞沫在空气中漂浮，人吸入呼吸道被感染发生禽流感。
（2）经过消化道感染。进食病禽的肉及其制品、禽蛋，病禽污染的水、食物，用病禽污染的食具、饮具，或用被污染的手拿东西吃，受到传染而发病。
（3）经过损伤的皮肤和眼结膜容易感染H5N1病毒而发病。
祝你健康！
猪流感的传染途径
传播途径：由人-人形式传播，打喷嚏、咳嗽和物理接触可传播病毒。微量病毒可留存在桌面、电话机或其它平面上，再透过手指与眼、鼻、口的接触来传播。
尿路感染的传染途径是什么？
尿路感染是由细菌直接侵袭所引起。尿路感染的发病率相当高，在我国一组人群普查中占9.1%。尿路感染分为上尿路感染和下尿路感染，上尿路感染指的是肾盂肾炎，下尿路感染包括尿道炎和膀胱炎 。那么，尿路感染的传染途径是什么?肾病专家称，尿路感染是细菌进入泌尿系统生长繁殖，导致炎症发生的一种疾病。 消炎药一般用抗生素治疗，但是抗生素不能滥用，肾病专家建议尿路感染患者一定要去做药敏试验确定使用哪种抗生素，对菌用药。滥用抗生素会导致产生耐药性，菌群失调，加重肾病病情，导致尿路感染反复。平时没有注意清洁卫生，导致肾病治疗好后再次感染。一直都没有治疗彻底导致反复发作。尿路感染的传染途径是什么?尿路感染的途径主要有： (1)上行感染：绝大多数尿感是由上行感染引起的。正常情况下，尿道口及其周围是有细菌寄生的，但一般不引起感染。当机体抵抗力下降或尿道粘膜有轻微损伤时，或者细菌的毒力大，粘附尿道粘膜和上行的能力强，容易侵袭膀胱和肾脏，造成感染。由于女性尿道口靠近 *** ，且女性尿道远较男性为短而宽，女婴的尿道口常被粪便污染，故更易致病。 (2)血行感染：细菌从身体内的感染灶(如扁桃体炎、鼻窦炎、龋齿或皮肤感染等)侵入血流，到达肾脏，先在肾皮质引起多发性小脓疡，然后，沿肾小管向下扩散至肾 *** 和肾盏、肾盂粘膜，但炎症亦可从肾 *** 部有轻微损伤的 *** 集合管(如尿中的结晶损伤)开始，然后向上向下扩散。血行感染途径较为少见，不及10%。血行感染比较多见于新生儿，或金黄色葡萄球菌败血症患者的血行性肾感染。 (3)淋巴道感染：下腹部和盆腔器官的淋巴管与肾周围的淋巴管有多数交通支，升结肠与右肾之间也有淋巴管沟通。当盆腔器官炎症、阑尾炎和结肠炎时，细菌也可从淋巴道感染肾脏。这种感染途径更为少见，甚至于这种感染途径是否存在，目前也有争论。 (4)直接感染：外伤或邻近肾脏的脏器有感染时，细菌可直接侵入肾脏引起感染，但是，这种情况临床上是十分罕见的。 ，过上正常人的生活。
已肝的传染途径是什么???
乙肝的传染途径有:
①母婴垂直传播：我国现有HBsAg阳性者约1.4亿人，其中85%通过母婴传播。垂直传播是我国乙型肝炎蔓延和高发的主要原因。也有少数为父婴传播者。母婴传播主要是通过产道感染或宫内感染。
②血液或血制品传播：被HBV污染的血制品如白蛋白、血小板或血液输给受血者，多数会发生输血后肝炎，另外血液透析、肾透析时也会感染HBV。
③医源性传播：被HBV污染的医疗器械（如手术刀、牙钻、内窥镜、腹腔镜等）均可传播HBV。
④家庭内密切接触：主要指性接触、日常生活密切接触（如同用一个牙刷、毛巾、茶杯和碗筷），均有受HBV感染的可能。HBV可通过破损粘膜进入密切接触者的体内。
⑤公共场所、理发店、美容院等容易被HBV污染，如浴池、剃刀等均可传染HBV。
流感病毒的传染途径有哪些
流感主要是通过空气传播，经呼吸道进入人体。人们在说话、呼吸，特别是咳嗽和打喷嚏时，喷出的唾液飞沫可达几万至上百万个。如果一个健康的人吸入了含有流感病毒的飞沫，这个人就有可能患流感。
乙肝的传染途径是什么？
乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（又称HBV）引起的，HBV存在于乙肝病人的血液、汗液、唾液、月经、乳汁及泪液等分泌物中。与乙肝急性期和慢性肝炎急性发作期时病人的上述体液及分泌物接触后，HBV进入血液中即可传染上乙型肝炎。
HBV进入血液的主要途径：
①母婴垂直传播：我国现有HBsAg阳性者约1.4亿人，其中85%通过母婴传播。垂直传播是我国乙型肝炎蔓延和高发的主要原因。也有少数为父婴传播者。母婴传播主要是通过产道感染或宫内感染。
②血液或血制品传播：被HBV污染的血制品如白蛋白、血小板或血液输给受血者，多数会发生输血后肝炎，另外血液透析、肾透析时也会感染HBV。
③医源性传播：被HBV污染的医疗器械（如手术刀、牙钻、内窥镜、腹腔镜等）均可传播HBV。
④家庭内密切接触：主要指性接触、日常生活密切接触（如同用一个牙刷、毛巾、茶杯和碗筷），均有受HBV感染的可能。HBV可通过破损粘膜进入密切接触者的体内。
⑤公共场所、理发店、美容院等容易被HBV污染，如浴池、剃刀等均可传染HBV。
预防措施
首先母婴传播是我国乙肝最主要的传播途径，国内十分重视，自80年代起HBsAg阳性孕妇出生的婴儿均普遍注射乙肝疫苗。通过20年的努力，上海市出生的婴儿HBsAg携带者从9.8%降至0.5%。因而我们可以骄傲地说，中国不久将来HBsAg 携带者将会明显降低，乙肝完全可以预防。其次严格筛选献血员，确保医用血液及血制品不被污染。
最后要加强对乙肝病人的治疗，慢性活动性乙肝首选α-干扰素抗病毒治疗。应加 *** 生常识普及宣传，养成良好卫生习惯。通过上述各种措施，相信不久的将来，乙肝病人将大大大减少。
消灭乙肝关键在于预防，乙肝病毒传播的途径概括起来有二个方面：
经血传染：如输入全血、血浆、血清或其它血制品。在热带、副热带的蚊虫以及各种吸血昆虫，可能会传播乙肝病毒。
母婴传播：孕妇是乙肝带原者，通过产道直接传染给新生儿。
体液传播：如医疗器材被乙肝病毒污染后消毒不彻底或处理不当引起传染。性接触的传播。与乙肝患者或带原者长期密切接触如：唾液、尿液、血液、胆汁及乳汁均会造成污染而传染乙肝。
:wy120./00news/content.aspx?data=healthid=759
:news.xinhua./health/2005-03/02/content_2637863.htm
水痘的传染途径是什么？
没事的，你要是以前出过水痘，就不必担心了，因为出过水痘的人会终身免疫，或者很久才会复发，但是复发几率很小。要是没出过，可能会被感染，但也不要惊慌，不要扣破，以免产生“麻子”，没出现高烧都没事的。4-7天可退，不要食用 *** 食物，不要用冷水。
梅毒的传染途径是什么？
湖南省总队医院专家介绍梅毒的传染途径是什么： 一、梅毒传播的两个基本要素 一方面要有病毒的携带者，一般来说，梅毒螺旋体主要存活在患者已受损伤的皮肤表面内部，如一期梅毒的硬下疳，二期梅毒的皮疹。此外，还有存活于患者的粘膜内，如 *** 粘膜、口腔粘膜。 另一方面取决于被传染者，受柒者的皮肤或粘膜必须有损伤，即使是一种肉眼难以查见、感觉极其轻微的损伤，也能成为梅毒螺旋体侵入机体的门户，这样带菌者的螺旋体就通过受染者的皮肤或粘膜损伤处进行传播。 二、直接性接触传染 这种方式是感染人数最多的一种梅毒的传染途径，据统计，95%～98%的梅毒患者是通过这种方式被传染上的。接吻、同性恋、以及各种方式的两性接触等行为都可能传染梅毒，损害可发生在口唇、 *** 、舌、咽部、手指等部位。梅毒的初期症状大多就出现在口唇、颊黏膜、硬腭、软腭、舌背、齿龈以及两性的生殖器等部位。 三、间接接触传染 通过梅毒的这种传染途径，受到传染的人数较少，但也不得不小心谨慎。尤其是与梅毒患者共同生活在一起的人，接触到患者使用过的内衣、 *** 、被褥、毛巾、剃刀、浴巾、浴盆、便器等，都有可能被感染：杯、碗可以感染口唇、口角或舌头，便器、马桶可以感染臀部和大腿后侧，被褥可以感染全身皮肤。因此，他人使用过的东西，一般不要轻易的去使用，即是迫不得已，也需要彻底的清洗干净。 四、胎传梅毒 患梅毒的妇女，未经治疗，怀孕后母亲体内的梅毒螺旋体可通过胎盘的血循环，经脐带传染到胎儿体内，使胎儿感染上梅毒。这种传染方式，称为胎传梅毒。也是梅毒的传染途径之一。胎传梅毒也可分为早期梅毒和晚期梅毒两种。 五、血源性传染 如果供血者是潜伏梅毒患者，他(她)所提供的血液中可能带有梅毒螺旋体。一旦输入到受血者的体内，即可产生感染，一般来说，在正规医院进行的输液，80%的情况下是不会出现问题的。 推荐阅读：湖南治疗梅毒最好的医院梅毒患者的注意事项是什么? 以上就是湖南省总队医院专家对于“梅毒的传染途径是什么?”的介绍，希望能帮助大家。
动物血样采集和血样处理应该注意哪些问题
一、选择好最佳采血时间
要选择好采血时间与免疫日期禽血液采集教程视频的间隔。鸡新城疫、禽流感、猪瘟、牛羊口蹄疫在免疫21天后采血禽血液采集教程视频，猪口蹄疫、高致性猪蓝病在免疫后28天采血。因为疫苗接种后，动物体内产生稳定抗体水平，需要一定的时间和过程。
二、做好血样采集前的准备工作
采样前，准备好采样所需的物品和防护用品，，如酒精棉、一次性注射器、记号笔、自封袋、标签、胶皮手套、口罩、防护服、胶鞋、保温箱等。
三、采样前消毒，采样后止血
采血前用75%酒精棉球局部消毒，以避免畜禽因采血而发生局部感染；鸡的皮肤游离性比较大，采血后容易形成血肿，所以采血后，要搞好止血，把酒精棉球挤净，压迫采血部位，防止血流过多。
四、保证血清质量
获得符合卫生要求和高质量的血清是采血的关键。采血方法同静脉注射，只是静脉注射的方向是针头扎向近心端，而采血的方向则相反，针头扎向远心端，这样采血顺利。采血时应使血液沿采血管壁流入瓶中，不能让血液直冲瓶底或滴入瓶底，容易引起溶血。
采完的血不要将采血管立放，这样血清不易析出。要将采血管塞好后平放或斜放于容器中，血清就会自然析出，也可用离心机分离血清。血样采好后，在来回的拿取的过程中， 要尽量避免振荡，防止溶血，影响监测结果。
五、保证采血样品量
在基层采血主要是作抗体效价的监测，一份血清可能做几种病的抗体效价监测，另外，有可能进行复查，所以血样一定要足。一般牛、猪、鸡血不少于3ml，血清量不少于1ml。
六、样品要有代表性
在同群中要随机抽样，不要挑着抽。更不要专挑那些不健康、消瘦。如果挑着采样，样品代表不了整体，监测的效果没有什么意义。抽样监测结果要代表群体，从抽样的抗体合格率率反应整体的合格率，只有随机才有代表性。
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七、采样的标记要填写规范
采血完成后，务必把采血的容器用标记笔记上标号或粘贴编号，同时填写采样单，并一一对应。
采样单是对采样品种群基本情况的简要记录，一定要认真填写，包括畜主、饲养量、采样量、采样时间、免疫时间、疫苗种类、生产厂家、剂量都要一一填写完整。
八、样品的保存
血样采好后，标记、整理、归类。
血凝实验操作报告
随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性，发病率越来越高。下面禽血液采集教程视频我为大家整理了关于血凝的实验报告，希望对禽血液采集教程视频你有锁帮助！
篇一：禽流感血凝和血凝抑制试验
禽流感血凝-血凝抑制试验操作方法及注意事项
禽流感血凝和血凝抑制试验可用于血清中抗体水平的监测，也可用于判断未使用疫苗群体的感染状态等。该试验是目前世界卫生组织和国际动物健康组织进行全球流感监测所普遍采用的方法，而且因其具有经济、快速、可靠、操作简便、能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽流感抗体水平等优点，已经成为当前基层兽医实验室禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。但因该试验受人为操作影响较大，经常因操作不规范、不严谨等造成结果偏差大、重复性差等问题，现根据几年来的工作经验对该试验过程中应注意的事项做一探讨。
一、 血凝试验操作程序
1、取96孔90°V形酶标板，用微量移液器在第一至第五排的1~12孔每孔加25 μL PBS液。
2、吸取25 μL标准禽流感抗原加入到第一排第1孔中充分混匀。
3、从第1孔吸取25 μL混匀后的抗原液加到第2孔中，混匀后吸取25μL加入到第3孔中，依次进行倍比稀释至第二排最后一孔即第24孔，最后弃去25 μL。第三排孔至第四排孔同上操作。
4、依次向第一至第五排孔的每孔中加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。
5、将酶标板置于微量振荡器上振荡10秒，室温（20-25℃）静置30 min观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。
6、结果判定：将板作45°倾斜，观察红细胞是否呈泪滴状流淌。以完全凝集（不流淌）的抗原或病毒最高稀释倍数为1个血凝单位（HAU）
二、血凝抑制试验操作程序
1、根据血凝试验结果配制4HAU抗原。（即1HAU抗原除以4）
2、取96孔V形酶标板，用移液器在第1~12孔各加入25 μL PBS。
3、在第1孔加入25 μL被检血清，充分混匀后移出25 μL加至第2孔，依次类推，倍比稀释至第12孔，弃去25 μL。
4、按以上步骤加入阳性血清和阴性血清（各做两份），作对照孔。
5、在第1~12孔各加入25 μL 4单位抗原，置于微量振荡器上轻轻混匀，室温20-25℃下静置30 min。
6、每孔加入25 μL 1%的鸡红细胞悬液。置于微量振荡器上轻轻混匀，室温（20-25℃）静置40 min后观察结果，若环境温度过高，可于4℃条件下进行，红细胞将呈明显的纽扣状沉到孔底。
7、结果判定：只有阴性对照孔血清滴度不大于2 log2，阳性对照孔误差不超过1个滴度，试验结果才有效。 将酶标板作45°倾斜，以完全抑制红细胞凝集的最大稀释倍数判为该血清的血凝抑制滴度。当被检血清效价大于等于4log2，判为禽流感抗体阳性。
三、试验过程中的注意事项
1样品的保存及试验前处理
1.1 采集的血液样品应及时分离血清，最好分装至离心管中，标记清楚，离心后吸出血清，对应编号冷藏送检，并禁止运输过程中剧烈震动。
1.2 一般情况下，在5天内检测的样品可放置在4℃的冰箱中冷藏，否则低温冷冻保存。
1.3 在检测前血清样品应充分混匀，混匀时采用上下缓慢颠倒几次的方法即可，切忌剧烈振荡而引起产生气泡及血清中蛋白变性。
1.4 对出现胶冻状的血清样品，可采用反复搅动几下再离心的方法有助于缓解该状态。胶状物是含纤维蛋白和纤维蛋白原的血清，可能是由于放置时间不够造成的血清未完全析出状态。不建议直接吸取其中少量的清亮血清。
1.5 水禽等样品为排除非特异性反应，还应相应进行灭能反应。具体操作方法：56℃水浴锅30min或加等量10%鸡红细胞，轻摇后静置30分钟，离心，收集上清液即可。
2器材的选择
2.1 酶标板的选择：
建议使用96孔90°V型板进行试验，通过反复试验证明：90°V型板相对于110°板及130°板来讲，具有红细胞沉降速度快，产生的凝集图像清晰、结果容易判定等优点。
2.2 移液枪的选择及使用：
①单道、多道可调微量移液枪应选择合适的量程，以便精确度的提高。
②使用时应采用一档吸液二档排液的方法。吸取液体时，枪头要深入液下缓慢平稳吸液。加缓冲液时
应加在板孔底部。倍比稀释血清时，应每孔至少反复吹吸6次，以便混合均匀，还应注意尽量避免产生泡沫引起混合不均。加抗原及红细胞时应在板内液面上方加样，以免交叉污染，影响试验结果。
③加样、倍比稀释时应高度集中注意力，以免漏加、重复加样等。
3试剂的保存及配置
3.1 禽流感血凝抑制试验所用的抗原、阳性血清应严格按照说明书的要求进行保存和配置，试验前应提前将其恢复至室内温。抗原的保存温度为-20℃，反复冻融会降低抗原的滴度，应避免反复冻融。
3.2 PH7.2、0.01mol/L的PBS液的制备
①应尽量现用现配
②每次使用前应测PH值，以免时间过长而导致PH值发生改变。
③由于PH试纸跨度范围偏大，PH值不易准确介定，因此最好采用酸度计准确测量PH值，以提高试验的精确度。
④全部试验均采用同一种稀释液。
3.3 1%红细胞的制备
①为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象，因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取2-3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。当然采血的前提条件是要按十分之一采血量比例在一次性注射器中加入抗凝剂，如肝素、枸椽酸钠、柠檬酸钠等。
②采血完毕后最好分装至2ml容量的圆底离心管中，因为通过2ml与1.5ml两种容量离心管相比较，放入1.5ml尖底离心管中的话，离心后，离心管底部红细胞不易与加入的PBS液混匀，易沉积在管底部，达不到洗脱干净的目的。
③经2000~3000r/min，5~10min，弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜，再加入十倍以上血量的PBS液，上下缓慢颠倒（切忌用力过大使红细胞破裂），使其充分混匀，再离心弃去上清液，反复几次直至上清液清亮透明为止。
④在加红细胞过程中还须不断轻摇以确保红细胞均匀，使其每孔加入相同数量的红细胞。
⑤制备好的红细胞液如果放置后上清液变红，说明有溶血，不可再使用。
3.4抗原液的配制
①先做血凝试验测定效价，以抗原与红细胞完全凝集的孔为1HUA抗原，配制4HUA抗原应往前推算两孔，即除以4后的值。
②每次做试验前，必须重新检测禽流感抗原的血凝效价，以免效价发生改变而导致抗原稀释倍数不准确，从而导致试验结果不准确。
③为保证配制的抗原准确，还要进行抗原回滴试验。具体方法：做二排抗原回滴，在两排的第1~8孔各加25微升PBS，取4HAU抗原25微升加在两排的第1、第2孔，混匀，从第2孔倍比稀释至第4孔，弃去25微升，另一排同样。从第2至第8孔补25微升PBS，以保持75微升总量不变，另一排同样。两排的第1至第8孔各加25微升1%红细胞，震荡10秒钟。静置30分钟观察结果。这样在第1孔为4HAU抗原，第2孔为2HAU抗原，第3孔为1HAU抗原，第4孔为1/2HAU抗原，均为75微升总量，第5至第8孔为空白对照。如果抗原回滴试验不成立，应相应调整抗原浓度直至回滴试验成立。因为如果抗原浓度过高，则所测定的抗体效价水平偏低，如果抗原浓度过低，则所测定的效价偏高。所以不调整抗原浓度至实验成立的话会对结果有很大影响。
4结果的判定
每次试验必须设阳性及阴性（空白）对照血清，判别试验是否成立。判读结果时，将酶标板倾斜45°，以孔底沉淀的红细胞流动性好，呈泪珠样流淌，边缘无凝集颗粒为凝集完全抑制。
5试验器具的清洗
每次试验完毕后，应将酶标板中液体甩净，然后用自来水反复冲净每个孔，再放入3%NaOH中4小时，清水反复冲净，再放入3%Hcl中4小时，清水反复冲净，再用蒸馏水反复冲洗几次，甩干水份，入干燥箱中干燥备用。实验用烧杯、加样槽、量筒等也应充分洗净、干燥。以免器具内有杂物、污物以及残留物从而影响试验结果。
四、小结
在进行禽流感血凝抑制试验时，应充分考虑到各方面的影响因素，提供的检测结果才会真实可靠，准确掌握禽类的’免疫抗体水平，进而为科学防控禽流感提供理论依据。
篇二：血凝抑制试验
血凝抑制（HI）试验简介
（以禽流感病毒为例）
一、原理
流感病毒颗粒表面的血凝素（HA）蛋白，具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构，HA试验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用
该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定，也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点
只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象，各亚型间无明显交叉反应禽血液采集教程视频；除鸡血清以外，用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素；需要在每次试验时进行抗原标准化；需要正确判读的技能。
四、试验步骤
1 阿氏（Alsevers）液配制
称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g，加蒸馏水至100mL，散热溶解后调pH值至6.1，
69kPa 15min高压灭菌，4℃保存备用。（3.8%枸橼酸钠（3.8g枸橼酸钠，100ml超纯水），101 kPa,20min高压灭菌，4℃保存备用,保存期1个月）。
2 10%和1%鸡红细胞液的制备
2.1采血
用注射器吸取阿氏液约1mL（3.8%枸橼酸钠），取至少2只SPF鸡（如果没有SPF鸡，可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡），采血约2～4mL，与阿氏液混合（3.8%枸橼酸钠），放入装10mL阿氏液（生理盐水）的离心管中混匀。
2.2 洗涤鸡红细胞
将离心管中的血液经1500～1800 r/min 离心8分钟，弃上清液，沉淀物加入阿氏液（生理盐水），轻轻混合，再经1500～1800 r/min离心8分钟，用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜，再重复2次以上过程后，加入阿氏液20 mL（生理盐水），轻轻混合成红细胞悬液，4℃保存备用，不超过5天。
2.3 10%鸡红细胞悬液
取阿氏液保存不超过5天的红细胞，在锥形刻度离心管中离心1500～1800 r/min 8分钟，弃去上清液，准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL)，加入9倍体积(mL)的生理盐水，用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。（此步
可省略，直接配制1%红细胞）
2.4 1%鸡红细胞液
取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL，加入9 mL生理盐水，混合均匀即可。（根据检测血清的数量，估算一下需要的1%鸡红细胞量，可按0.3ml/每份血清）
3 抗原血凝效价测定（HA试验，微量法）
3.1 在微量反应板的1孔～12孔均加入25μl PBS（生理盐水），换滴头。
3.2吸取25μl抗原加入第l孔，混匀。
3.3从第1孔吸取25μl，病毒液加入第2孔，混匀后吸取25μl加入第3孔，如此进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μl弃之，换滴头。
3.4每孔再加入25μl PBS（生理盐水）。
3.5每孔均加入25μl 体积分数为1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。
3.6振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。
3.7结果判定 将板倾斜，观察血凝板，判读结果（见下表）。
表1：血凝试验结果判读标准
能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU）。注意对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。
4 血凝抑制（HI）试验（微量法）
4.1 根据3的试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。
4.2 在微量反应板的1孔～11孔加入25μl PBS（生理盐水），第12孔加入50μl PBS（生理盐水）。
4.3 吸取25μl血清加入第1孔内，充分混匀后吸25μl于第2孔，依次倍比稀释至第10孔，从第10孔吸取25μl弃去。
4.4 1孔～11孔均加入含4HAU抗原25μl，室温（约20℃）静置至少30min。
4.5 每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件
下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。
4.6 结果判定
试验成立的条件：只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2，阳性对照孔血清误差不超过1个滴度，试验结果才有效。
以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性；HI价大于或等于41og2为阳性。
五、HI试验注意事项
1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对Re-4和Re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。
同一亚型的禽流感病毒制成的抗原，如果毒株来源不同，则可能会存在抗原性差异，从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲，疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时，则所测得的HI效价较高。
2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用，冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染，可以无菌操作将试剂分装成小包装。
3、反应温度不能太高。若在37℃ （如温箱）下进行。
篇三：血凝和血凝抑制试验
随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高，人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及操作方法。
应用：
用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。
下面以新城疫病毒为例，介绍血凝和血凝抑制试验的方法：
注意事项：
一、样本要具有代表性：所采样本要能代表整体，通常采用四角加中间的随机取样法，并且确定适当的样品数量，一般1000只以下的鸡群采样率在2～5%；5000只以下1～2%；5000只以上0.5～1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋；对雏鸡或青年鸡，可采血。方法是：取青霉素小瓶，洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分，并注意不要用消毒剂，以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右，最好不低于1ml，在室温下静置至血清自然析出。
二、四单位抗原的准确性：要获得准确的监测效果，先做红血球的凝集试验，即测得抗原的血凝价，尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。
三、红血球洗脱的充分性：原则上，新城疫检测所用的红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡，但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡，有时甚至是病鸡。因此，对红血球的洗脱的次数要多、要充分，并注意转速和时间，通常采用五次变速离心法：前四次为每分钟1500转，每次5分钟，最后一次为每分钟3000转，持续7～8分钟。另外，洗红血球过程中，应注意动作要轻，玻璃仪器之间尽量减少碰撞，以免造成红血球破裂而影响结果。
四、结果判定的及时性：检测中，每次试验均应设抗原与生理盐水对照，加入红血球后，每隔5分钟观察一次，一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时，应立即对样本进行结果判定，过早过晚都会影响判定结果的准确性。
血凝与血凝抑制试验的操作方法
一、材料与仪器：新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔V型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。
二、方法：
1%鸡红血球的制备：
1.用长针刺入鸡心脏或翅下静脉，采血，采血量视用量而定，5%抗凝剂与全血的比例为1∶3～4。
2.洗血球：共洗4～5次，每次5～8分钟，红血球与生理盐水的比例至少为1∶2～3。离心机转速为每分钟1500～3000转，最后倾去上清。
3.吸红血球泥1ml加生理盐水99ml，配成1%红血球备用。
三、血凝试验：
1.血凝板上12个孔内全部加入生理盐水，每孔0.05ml，吸等量新城疫抗原于第一孔内，混匀后吸出同量于第二孔内混匀，以此类推稀释至第11孔，并弃去0.05ml，留第12孔作为生理盐水对照，然后全部孔内加入1%鸡红血球。
2.将血凝板置于振荡器上振荡1～2分钟，使材料充分混均，放入恒温培养箱，每5分钟观察一次，至10～15分钟取出，一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。
3.结果判定：红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集（++++），在血凝板底部集为一小红点为沉淀（－），如底部为一小红点，四周为凝集的红细胞，则为不完全凝集（++）。
4.出现完全凝集的抗原的最高稀释度，即为该抗原的凝集价。
5.四单位抗原的制备：血凝试验的结果如为28（256），则前移2孔即26（64），作为四单位抗原的稀释度。即：63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。
四.血凝抑制试验：
1.血凝板上1～11孔全部加入0.05ml的生理盐水，于第一孔内加入等量的被检抗体，稀释至第10孔，弃去0.05ml，再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔，第11孔为抗原对照，12孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡1～2分钟，放置室温约20分钟，然后加入等量的1%鸡红血球，振荡后放入恒温培养箱大约10～15分钟后进行结果判定。
2.结果：能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的最高稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。
注：1、HI价在23～24时免疫可产生良好的免疫应答，如在疫区可提高到24～25免疫。
2、24～25HI210时为最好。3、如HI价高于211则为强毒污染。
注：#为完全抑制，++为不完全抑制，－为不抑制。
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